RESUMO Espécies do gênero Meloidogyne constituem um dos fatores limitantes à produção de olerícolas. Estudos têm sido realizados no Brasil a respeito da ocorrência de espécies de nematoide de galhas em áreas de cultivo de olerícolas sem o uso de técnica avançada. O uso de técnicas modernas, tais como, os métodos bioquímicos e moleculares aumentam a segurança na identificação das espécies de Meloidogyne. Neste trabalho foram caracterizadas espécies de Meloidogyne associadas a olerícolas em um total de 36 amostras por meio de eletroforese de isoenzimas, marcadores SCAR e morfológico. Além disso, foram validados marcadores SCAR para identificação acurada dessas espécies. Desta forma, foram identificadas as espécies M. incognita, M. javanica, M. hapla, M. morocciensis e M. arenaria, sendo as duas primeiras espécies mais frequentes. Foram ainda relatadas, pela primeira vez no Brasil, as espécies: M. arenaria parasitando plantas de jiló e M. morocciensis parasitando plantas de abóbora e repolho. A eletroforese de esterase foi eficiente em separar todas as espécies de Meloidogyne encontradas em olerícolas. Entretanto, os marcadores SCAR foram eficientes, somente, na identificação de M. incognita, M. javanica e M. hapla, no entanto, os primers Far/Rar não promoveram amplificação para confirmação da identidade de M. arenaria. Na avaliação da configuração perineal de fêmeas, não foi possível distinguir as espécies M. arenaria e M. morocciensis. Com base nos resultados, novos primers devem ser desenvolvidos para identificação de M. arenaria e M. morocciensis.

ABSTRACT Species of the genus Meloidogyne are limiting factors in vegetable crop production. Studies in Brazil about the occurrence of root-knot nematodes in areas of vegetable crop growth have been conducted without using advanced techniques. Using modern techniques, such as biochemical and molecular methods, improves the accuracy of Meloidogyne species identification. The present study characterized species of Meloidogyne in 36 samples associated with vegetable crops using isoenzyme electrophoresis, SCAR markers, and morphological markers, in addition to validating SCAR markers for accurate species identification. The species M. incognita, M. javanica, M. hapla, M. morocciensis, and M. arenaria were identified, with the first two being the most frequent. Here, the species M. arenaria parasitizing scarlet eggplant and M. morocciensis parasitizing pumpkin and cabbage are reported in Brazil for the first time. Esterase electrophoresis efficiently separated the species of Meloidogyne found in vegetable crops; however, SCAR markers were only effective for the identification of M. incognita, M. javanica, and M. hapla, since the primer pair Far/Rar yielded no amplification product to confirm the identity of M. arenaria. The species M.arenaria and M. morocciensis could not be distinguished by the female perineal patterns. Based on the present results, new primers should be designed for the identification of M. arenaria and M. morocciensis.

In a previous study, substances with nematicidal properties were detected in the bark of Cryptocarya aschersoniana. Continuing such study, the methanol extract from this plant underwent fractionation guided by in vitro assays with the plant-parasitic nematode Meloidogyne exigua. Two active compounds were isolated and identified by spectroscopic methods as (E)-6-styrylpyran-2-one and (R)-goniothalamin. The latter compound was also active againstMeloidogyne incognita. In silico studies carried out with (R)-goniothalamin and the enzyme fumarate hydratase, which was extracted from the genome of Meloidogyne hapla and modeled using computational methods, suggested that this substance acts against nematodes by binding to a cavity close to the active site of the enzyme.

Com o objetivo de contribuir para o desenvolvimento de produtos para o controle de Meloidogyne exigua, as bactérias Bacillus cereus e B. subtilis foram cultivadas em meio líquido de cultura para produzirem metabólitos ativos contra este nematoide parasita de plantas. Os fracionamentos dos extratos em diclorometano dos meios de cultura produziram uracila, 9H-purina e di-idrouracila. Todos os compostos foram ativos contra M. exigua, sendo o último o mais eficiente. Ele apresentou CL50 de 204 µg/mL contra o nematoide, enquanto uma CL50 de 260 µg/mL foi observada para o nematicida comercial carbofuran. Uma busca por complexos proteína-ligante nos quais o ligante fosse estruturalmente similar à di-idrouracila resultou na seleção de fosforibosiltransferases, cujas sequências foram utilizadas em uma busca in silico no genoma de M. incognita por sequência de aminoácidos semelhante. A sequência resultante foi modelada e di-idrouracila e 9H-purina foram inseridos nos sítios ativos desta provável fosforibosiltransferase, resultando em complexos proteína-ligante que foram submetidos a simulações por dinâmica molecular. Cálculos das energias livres de ligação destes complexos revelaram que a constante de dissociação de di-idrouracila e 9H-purina da enzima é da ordem de 8,3 x 10-7 e 1,6 x 10-6 M, respectivamente. Consequentemente, estas substâncias e a provável fosforibosiltransferase podem ser de grande utilidade para o desenvolvimento de novos produtos para o controle de M. exigua.

To contribute to the development of products to controlMeloidogyne exigua, the bacteria Bacillus cereus and B. subtilis were cultivated in liquid medium to produce metabolites active against this plant-parasitic nematode. Fractionation of the crude dichloromethane extracts obtained from the cultures afforded uracil, 9H-purine and dihydrouracil. All compounds were active against M. exigua, the latter being the most efficient. This substance presented a LC50 of 204 µg/mL against the nematode, while a LC50 of 260 µg/mL was observed for the commercial nematicide carbofuran. A search for protein-ligand complexes in which the ligands were structurally similar to dihydrouracil resulted in the selection of phosphoribosyltransferases, the sequences of which were used in an in silico search in the genome of M. incognita for a similar sequence of amino acids. The resulting sequence was modelled and dihydrouracil and 9H-purine were inserted in the active site of this putative phosphoribosyltransferase resulting in protein-ligand complexes that underwent molecular dynamics simulations. Calculation of the binding free-energies of these complexes revealed that the dissociation constant of dihydrouracil and 9H-purine to this protein is around 8.3 x 10-7 and 1.6 x 10-6 M, respectively. Consequently, these substances and the putative phosphoribosyltransferase are promising for the development of new products to control M. exigua.

Meloidogyne exigua is a plant-parasitic nematode that causes great losses to coffee farmers. Thus, to contribute to the development of new products to control this parasite, the present work studied the effect of volatile organic compounds (VOC) on the nematode and coffee plants (Coffea arabica), since these compounds are known to be used in plant defense against other agronomical pests. The number of galls of M. exigua was reduced when the aerial part of coffee plants was sprayed with combinations of methyl jasmonate + jasmone, (Z)-hex-3-en-1-ol + (E)-hex-3-en-1-ol + (Z)-hex-2-en-1-ol + (E)-hex-2-enal, (E)-hex-2-enyl acetate + hexyl acetate, meso-butane-2,3-diol + butane-1,2-diol + butane-1,3-diol + butane-1,4-diol, 3-hydroxybutan-2-one + 4-hydroxybutan-2-one or linalyl acetate + nerolidol. These VOC also caused alterations in the concentrations of substances such as alkaloids, phenols, amino acids and carbohydrates, in the roots of coffee plants. The findings suggest that these VOC may be explored as potential products for the control of M. exigua in coffee plants.

La principal fuente de energía de los nematodos entomopatógenos (NEP) en su fase infectiva son los lípidos, el nivel de esas reservas puede estar influenciado por el almacenamiento e interferir en su infectividad. El objetivo de este trabajo fue evaluar el porcentaje de lípidos en juveniles infectantes (JI) almacenados en diferentes temperaturas y asociar esto con su infectividad. Suspensiones de Steinernema carpocapsae, S. riobravis, Heterorhabditis sp. JPM4, Heterorhabditis sp. CCA y Heterorhabditis sp. PI fueron incubadas por cero, 15, 30, 60, 90, 120, 150 y 180 días a 8, 16, 20, 24 y 28°C. La cantidad de lípidos se evaluó a través del método colorimétrico. Para cada tratamiento se evaluó la infectividad de los JI en Galleria mellonella. Todos nematodos presentaron reducción de lípidos a lo largo del tiempo, sin embargo, hubo variación de acuerdo con la temperatura. Los nematodos mantuvieron sus lípidos por mayor tiempo en 8, 16 y 20°C, ya en 24 y 28°C el porcentaje disminuyó rápidamente. Los JI de Heterorhabditis se mostraron menos tolerantes a las temperaturas de 8, 24 y 28°C comparados con los del género Steinernema en relación a la infectividad. Las temperaturas de 16 y 20°C fueron las que menos afectaron la infectividad al final de los 180 días. De esta manera, los lípidos y la infectividad están influenciados por el almacenamiento a diferentes temperaturas, en las especies experimentadas. Estos datos son de gran utilidad para tener éxito en el uso de nemátodos entomopatógenos como agentes de control biológico.

Lipids represent the main source of energy in entomopathogenic nematodes. In the infective juvenile (IJ) phase, the level of such reserves can be influenced by storage, and this may affect their infectivity. The aim of this study was to evaluate the percentage of lipids and the associated infectivity in IJs of Steinernema carpocapsae, S. riobrave, Heterorhabditis sp. JPM4, Heterorhabditis sp. CCA and Heterorhabditis sp. PI that had been stored under different temperatures (8-28°C) for various times (0 to 180 days). The amounts of lipids present in IJs were evaluated histologically using a colorimetric method, while infectivity was assayed against Galleria mellonella larvae. Lipid levels diminished with increasing storage time for all nematodes, but the rates of decrease varied according to storage temperature and species. Lipid reserves were conserved for longer storage periods at 8, 16 and 20°C, while at 24 and 28°C the percentage of lipids decreased rapidly. The infectivities of IJs of Heterorhabditis spp. were less tolerant than those of Steinernema spp. to temperatures of 8, 24 and 28°C. Thus, while storage at 8°C was optimal for conserving lipid reserves, infectivity was best preserved at temperatures of 16 and 20°C gave rise to the least reduction in infectivities after 180 days of storage. In this way, lipids and infectivity are influenced by different storage temperatures for the species tested. These data are useful for greater success in using entomopathogenic nematodes as biocontrol agents.

Com o objetivo de selecionar rizobactérias produtoras de fitotoxinas para uso no controle de plantas daninhas, vinte e cinco isolados bacterianos previamente obtidos das rizosferas de diferentes plantas foram cultivados em meio líquido e, após remoção das células por centrifugação, as fases líquidas foram liofilizadas e os resíduos obtidos foram submetidos à extração com acetato de etila/metanol. Os extratos foram concentrados sob vácuo até secura e dissolvidos em água e solução de sacarose para serem submetidos a testes in vitro de germinação de sementes de alface (Lactuca sativa L.) e de crescimento de coleóptilos de trigo (Triticum aestivum L.). Embora a maior parte das amostras tenha desfavorecido o crescimento dos coleóptilos de trigo, somente as provenientes de quatro isolados reduziram a germinação das sementes de alface. Dois isolados de Bacillus cereus, um isolado de B. pumilus e um de Stenotrophomonas maltophilia foram os microrganismos mais promissores para a produção de fitotoxinas, com possibilidade de uso no desenvolvimento de novos produtos para o controle de plantas daninhas.

In order to select phytotoxin producing rhizobacteria to control weed plants, twenty five bacterial strains previously isolated from the rhizospheres of various plants were grown in a liquid medium and, after cell removal by centrifugation, the liquid phases were freeze-dried and the products were extracted with ethyl acetate/methanol. The extracts were concentrated to dryness under vacuum and dissolved in water and sucrose solution to be submitted to in vitro assays of lettuce (Lactuca sativa L.) seed germination and wheat (Triticum aestivum L.) coleoptile growth. Although most samples affected coleoptile growth, only those from four strains reduced lettuce seed germination. Two strains of Bacillus cereus, one strain of B. pumilus and one of Stenotrophoonas altophilia were the most promising microorganisms for producing phytotoxin and, consequently, for the development of new weed control products.

A reação de sete genótipos de Coffea arabica a 10 populações de Meloidogyne spp. coletadas principalmente em plantios de café no Brasil e Costa Rica foi avaliada em casa de vegetação. O inóculo consistiu de 10.000 ovos por planta. As avaliações foram realizadas 8 meses após as inoculações considerando-se a massa da matéria fresca das raízes, índices de galhas e massas de ovos, número de ovos por grama de raiz e fator de reprodução (FR). As cultivares Obatã IAC 1669-20, Sarchimor IAC 4361 e Tupi Amarelo IAC 5111 exibiram suscetibilidade às quatro populações brasileiras de M. exigua. Entretanto, cv. Tupi Vermelho IAC 1669-33 mostrou-se resistente (FR=0,7) a uma população de M. exigua proveniente de Lavras, MG, Brasil. A população de M. exigua oriunda de Bom Jesus de Itabapoana, RJ, Brasil foi altamente virulenta à cv. IAPAR 59 (FR= 165,7), portadora do gene de resistência Mex-1 e ao genótipo Paraíso (H 419-5-4-5-2) (FR=396,2). A população de Meloidogyne sp. do cafeeiro, Garça, SP, Brasil, reproduziu-se em baixos níveis (FR = 0,1 - 3,9) sobre todos os genótipos. Todas as cultivares testadas foram suscetíveis a M. incognita e M. paranaensis. A reprodução de M. mayaguensis obtida de goiabeira, PR, Brasil, foi baixa (FR = 0,0-1,6), em todos os genótipos. Entretanto, outra população obtida do cafeeiro na Costa Rica apresentou valores de FR que variaram de 0,8 a 12,4. Os resultados deste trabalho mostraram, pela primeira vez, a capacidade de uma população de M. exigua obtida em campo de superar a resistência conferida pelo gene Mex-1.

The reaction of seven genotypes of Coffea arabica to 10 Meloidogyne spp. populations collected mainly from coffee plantations in Brazil and Costa Rica was evaluated under greenhouse conditions. The inoculum consisted of 10,000 eggs per plant. Evaluations were done 8 months after inoculations considering the root fresh weight, gall and egg mass indices, number of eggs per gram of root and reproduction factor (RF). The cultivars Obatã IAC 1669-20, Sarchimor IAC 4361 and Tupi Amarelo IAC 5111 exhibited susceptibility to the four Brazilian M. exigua populations tested. However, cv. Tupi Vermelho IAC 1669-33 revealed resistance (RF value of 0.7) to the M. exigua population from Lavras, Minas Gerais State, Brazil. A population of M. exigua from Bom Jesus de Itabapoana, Rio de Janeiro State, Brazil, was highly virulent on cv. IAPAR 59 (RF= 165.7), bearing resistance gene Mex-1, and was also virulent on genotype Paraíso (H 419-5-4-5-2) (RF=396.2). A Meloidogyne sp. population on coffee from Garça, São Paulo State, Brazil, reproduced at low rates (RF ranging from 0.1 to 3.9) on all genotypes. All tested cultivars were susceptible to M. incognita and M. paranaensis. M. mayaguensis of guava from Paraná State, Brazil, reproduced at low rates in all coffee genotypes; however, another population of coffee, from Costa Rica, was more aggressive and showed RF value that ranged from 0.8 to 12.4. Results of this study point for the first time to the ability of a naturally occurring M. exigua population to overcome the resistance conferred by the Mex-1 gene.

Com vistas a contribuir para o desenvolvimento de métodos não agressivos ao meio ambiente, para o controle de plantas invasoras, buscou-se selecionar rizobactérias produtoras de substâncias fitotóxicas. Inicialmente, 35 culturas previamente isoladas de plantas da região sul do Estado de Minas Gerais (Brasil) foram cultivadas em caldo soja tripticaseína. Após remoção das células bacterianas, os líquidos resultantes foram liofilizados e extraídos com metanol/acetato de etila (1:1). Os extratos foram concentrados sob vácuo e submetidos a testes com sementes de alface (Lactuca sativa L.). Os metabólitos produzidos por cinco isolados bacterianos reduziram o número de plântulas normais para valores estatisticamente inferiores aos observados para o controle negativo, sendo os mais expressivos resultados obtidos com Bacillus cereus Frankland and Frankland, isolado de Ricinus communis L., que causou necroses nas radículas de 82,4% das plântulas. Os metabólitos dessa bactéria também impediram a germinação de 52% das sementes de Brachiaria decumbens Stapf e fizeram com que as 48% restantes dessem origem a plântulas anormais. Os metabólitos de B. cereus foram submetidos a processos de purificação direcionados por testes com sementes de alface. Em decorrência, isolou-se uma substância, que será identificada em estudos futuros. Na concentração de 0,057 g/L, causou necrose nas radículas de todas as plântulas de alface provenientes do teste com sementes.

To contribute for the development of environmental friendly methods for weed control, a selection of rhizobacteria able to produce phytotoxic substances was carried out. Initially, 35 strains previously isolated from plants in the south of Minas Gerais State (Brazil) were grown in tryptic soy broth. After removal of bacterial cells, the resulting liquids were freeze-dried and extracted with methanol/ethyl acetate (1:1). The extracts were concentrated under vacuum and dissolved in water to be submitted to a lettuce (Lactuca sativa L.) seed assay. Metabolites produced by five strains reduced the number of normal seedlings to values statistically bellow the one observed for the negative control, being the most expressive results obtained with Bacillus cereus Frankland and Frankland, isolated from Ricinus communis L., which was able to cause rotted rootlets to 82.4% of seedlings. The bacterium metabolites also avoided germination of 52% Brachiaria decumbens Stapf seeds and the remaining 48% resulted in abnormal seedlings. Metabolites from B. cereus were submitted to a purification process guided by the lettuce seed assay. As a consequence, one substance causing rotted rootlets to all lettuce seedlings during the seed assay at 0.057 g/L was isolated and will be identified in future studies.

A flutuação populacional de juvenis do segundo estádio (J2) de M. incognita e sua infectividade foram estudadas por meio de bioteste em solo revolvido com ou sem irrigação, comparadas a condições de solo não revolvido nem irrigado, considerado testemunha, e com apenas irrigado, em casa-de-vegetação por 14 dias. Aos sete dias, a população de J2 no solo foi significativamente reduzida apenas nas parcelas revolvidas. Entretanto, a infectividade do inóculo no solo nesse período, avaliada em bioteste, foi reduzida apenas nas parcelas revolvidas e irrigadas. Aos 14 dias, a população de J2 no solo foi menor nas parcelas revolvidas com ou sem irrigação, porém continuou sendo a mais baixa nas parcelas apenas revolvidas. Contudo, a infectividade do inóculo no solo neste período foi mais baixa nas parcelas revolvidas e irrigadas e mais elevada na testemunha.

The population fluctuation of second-stage juveniles (J2) of M. incognita and their infectivity assessed by biotest were studied in the greenhouse, using plowed soil, irrigated or not, compared to control (unplowed and unirrigated) and to plots irrigated only, for 14 days. At seven days, the J2 population in the soil was significantly reduced only in plowed plots. However, the soil inoculum infectivity, in this period, was reduced only in plowed and irrigated plots. At 14 days, the J2 population in the soil was lower in plowed plots with or without irrigation, but lowest in plots only plowed.The infectivity of soil inoculum, in this period, was lowest in plowed and irrigated soil and highest in the control.

A demanda por produtos orgânicos é crescente devido às restrições ao uso dos agroquímicos sintéticos. Para verificar o efeito das plantas antagonistas no controle de fitonematóides na cultura da alface americana (Lactuca sativa) e do repolho (Brassica oleracea var. capitata), em cultivo orgânico, instalou-se um experimento na Universidade Federal de Lavras, no período de dezembro de 2001 a agosto de 2002. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados em esquema fatorial 4 x 2, com três repetições. O primeiro fator foi constituído pelas leguminosas mucuna-preta (Stizolobium aterrimum), feijão-de-porco (Canavalia ensiformis), crotalária (Crotalaria juncea) em cultivo orgânico e por uma testemunha (vegetação espontânea) em cultivo convencional. O segundo, pelas culturas de alface americana cultivar Raider e repolho, cultivar Kenzan. Os tratamentos foram constituídos por todos em cultivo orgânico e testemunha (vegetação espontânea) em cultivo convencional. As populações de Meloidogyne spp. e de Helicothylenchus dihystera foram avaliadas empregando-se a técnica de Jenkins. As amostras de solo utilizadas para quantificar os nematóides foram retiradas aos 45 dias após o plantio das leguminosas; aos 30 e 60 dias após o plantio da alface americana e aos 30, 60 e 90 dias após o plantio do repolho. A incorporação das leguminosas mucuna-preta e crotalária, em cultivo orgânico, reduziu a população de Meloidogyne spp. em 42 e 51%, respectivamente, nessas hortaliças. A leguminosa feijão-de-porco causou redução da população de nematóide apenas nas parcelas com repolho apos 90 dias.

The demand for organic products is increasing because of restrictions on the use of synthetic agrochemicals. In order to verify the effect of antagonistic plants on the control of phytonematodes in the culture of crisphead lettuce (Lactuca sativa) and cabbage (Brassica oleracea var. capitata), an experiment was installed at the Federal University of Lavras, between December 2001 and August 2002. The experimental design was of randomized blocks in a factorial scheme with three replications and four treatments. The treatments consisted of black velvet bean (Stizolobium aterrimum), jack bean (Canavalia ensiformis), sunn hemp (Crotalaria juncea) and a control plot with spontaneous vegetation. The populations of Meloidogyne spp. and Helicothylenchus dihystera were evaluated using the Jenkins technique. The soil samples used to quantify the nematodes were taken 45 days after seeding the leguminous plants, 30 and 60 days after seeding the crisphead lettuce and 30, 60 and 90 days after planting the cabbage. The incorporation of the black velvet bean and sunn hemp legumes reduced the population of Meloidogyne spp. by 42 and 51%, respectively; in the area previously planted with jack bean, the nematode populations on cabbage were reduced at 90 days.

A resistência do cafeeiro (Coffea arabica) Iapar-59 a Meloidogyne exigua foi comparada com a cultivar IAC-Apoatã, empregada como padrão de resistência, e com as cultivares suscetíveis Mundo Novo (IAC 379-19), Catuaí (IAC 62) e Tupi (IAC 1669-33). Plantas de um ano de idade foram inoculadas com 10.000 ovos de M. exigua. Aos 93 dias da inoculação avaliou-se a reprodução de M. exigua através do número de galhas (NG), número de ovos (NO), fator de reprodução (FR), reducão no fator de reprodução e comportamento dos cafeeiros. Menor reprodução de M. exigua foi igualmente (P<0,05) observada nos cafeeiros Iapar-59 e Apoatã, nos quais o IG, NO e FR foram menores do que aqueles observados nas cultivares Mundo Novo, Catuaí e Tupi. Maior redução no FR de M. exigua ocorreu nos cafeeiros Apoatã e Iapar-59, indicando a reação de resistência do Iapar-59.

The resistance of the Iapar-59 coffee (Coffea arabica) cultivar to Meloidogyne exigua was compared with cv. IAC-Apoatã, used as a resistance standard, and with susceptible cultivars Mundo Novo (IAC 379-19), Catuaí (IAC 62) and Tupi (IAC 1669-33). One-year old plants were inoculated with 10,000 of M. exigua eggs and 93 days after inoculation, the reproduction of M. exigua was evaluated by determining the number of galls (NG), the number of eggs (NO), the reproduction factor (RF), reduction in the reproduction factor (RFR) and behaviour of the coffee plant. A lower degree of M. exigua reproduction was equally observed in 'Iapar-59' and 'Apoatã', in which NG, NO and the FR were lower then those observed in 'Mundo Novo', 'Catuaí' and 'Tupi'. Greater reduction in the reproduction factor (RFR) of M. exigua observed in 'Apoatã' and 'Iapar-59' indicaties a resistance reaction of 'Iapar-59'.

Dez filtrados de culturas de actinomicetos causaram redução na motilidade e 100% de mortalidade de J2 de Meloidogyne javanica. A diluição de alguns causou redução de 75 a 85% de mortalidade. Contudo, o filtrado do isolado PIC 1 causou, mesmo em diluição, 100% de mortalidade. Alguns filtrados reduziram a motilidade sem causar mortalidade. Dos isolados que causaram mortalidade também reduziram eclosão de J2. Entretanto, a porcentagem de redução variou ao longo do período de crescimento do actinomiceto em meio líquido. Exsudatos obtidos de colônias de alguns isolados de actinomicetos crescidos em meio sólido causaram 100% de mortalidade e redução na motilidade de J2 de M. javanica. Os isolados de actinomicetos ALF 4 e QUI 4 produziram substâncias tóxicas a J2 tanto em filtrado quanto em exsudato de colônia.

Ten filtrates of actinomycetes cultivated in liquid medium, induced reduction of motility and 100% mortality of Meloidogyne javanica J2. Some of them, when diluted in water, reduced mortality to 75 a 85%. However, the isolate PIC 1, maintened J2 mortality of 100%, even after dilution in water. Some filtrates reduced motility, without causing mortality. Among the isolates that caused mortality, some also reduced J2 hatching. Nevertheless, the level of hatching inhibition varied with the growing status of the actinomycete in liquid medium. Exudates obtained from some actinomycete cultures in solid medium induced 100% mortality and reduction on motility of J2 of M. javanica. The isolates of actinomycetes ALF 4 and QUI 4 produced substances toxic to J2 in filtrates and in colony exudates as well.

Juvenis do segundo estádio (J2) de Meloidogyne incognita foram incubados nos exsudatos radiculares de soja (Glycine max), tomateiro (Lycopersicon esculentum), cafeeiro (Coffea arabica), feijoeiro (Phaseolus vulgaris), mostarda (Brassica rapa), Crotalaria juncea e C. spectabilis e em água por 12 h. Em seguida, realizou-se o teste de adesão por centrifugação ou por borbulhamento. Em outro ensaio, endósporos de Pasteuria penetrans foram incubados por quatro dias a 26 ºC nos exsudatos e submetidos à adesão em J2 de M. incognita, sob borbulhamento constante por 24 h em tubos contendo água. Os J2 com endósporos aderidos pelo teste de borbulhamento foram inoculados em mudas de tomateiro. Verificou-se que a incubação dos J2 por 12 h nos exsudatos radiculares testados reduziu o número de endósporos de P. penetrans por J2 independentemente do método de adesão empregado. Os J2 incubados nos exsudatos radiculares testados proporcionaram menor número de fêmeas parasitadas em tomateiro em relação à testemunha (água), bem como menor número de galhas com exceção dos J2 incubados em exsudato do próprio tomateiro. A reprodução dos J2 incubados nos exsudatos radiculares não foi afetada quando comparada à testemunha. A incubação dos endósporos nos exsudatos das plantas testadas reduziu a adesão e a infetividade em J2, em relação à testemunha. Após 28 dias da inoculação, observou-se redução no número de fêmeas parasitadas resultantes da infecção desses J2 com endósporos incubados em exsudatos radiculares comparada com aqueles incubados em água. O parasitismo do J2 com endósporos tratados com exsudatos radiculares e a reprodutividade de fêmeas oriundas da infetividade desses J2 foram semelhantes aos incubados em água.

In one assay, second stage juveniles (J2) of Meloidogyne incognita were incubated in root exudates of soybean (Glycine max), tomato (Lycopersicon esculentum), coffee (Coffea arabica), bean (Phaseolus vulgaris), mustard (Brassica rapa), Crotalaria juncea and C. spectabilis and in water for 12 h, followed by endospores adhesion by centrifugation or by air bubbling. In another assay, endospores of Pasterius penetrans were incubated for four days at 26 ºC in the exudates and submitted to adhesion on J2 of M. incognita by constant air bubbling for 24 h in tubes containing water. The J2 with endospore adhesion by air bubbling were inoculated in tomato seedlings. The incubation of J2 for 12 h in the root exudates reduced the number of P. penetrans endospore per J2, regardless of the adhesion test used, and resulted in fewer parasitized females when compared with the control, as well as a lower number of galls, except in the J2 incubated in exudate of tomato. The reproduction of incubated J2 in the root exudates was not affected when compared to the control. The endospore incubation in the exudates of the tested plants reduced the adhesion and the infectivity of these endospores to J2 in relation to the control. After 28 days from inoculation, reduction was observed in the number of parasitized females resulting from infection of those J2 with endospore incubated in exudates when compared with those incubated in water. The parasitism of J2 with endospore treated with exudates and the reproduction of infected J2 females were similar to those incubated in water.

Filtrados das culturas de 40 isolados de bactérias endofíticas, obtidos a partir do sistema radicular de diferentes espécies de plantas foram testados na motilidade, mortalidade e eclosão de juvenis de segundo estádio (J2) de Meloidogyne javanica. As bactérias foram cultivadas em meio líquido "trypic soy broth" por sete dias sob agitação constante a 28 ºC, centrifugadas a 10.000 g por 15 min e o sobrenadante passado em filtro millipore de 0,22 µm de abertura. Cerca de 100 ovos ou 100 J2 foram colocados em contato com cada filtrado bacteriano, para os ensaios de eclosão, motilidade e mortalidade. As avaliações foram feitas após 24 e 48 h para motilidade e mortalidade e após 15 dias para eclosão. Dos isolados testados, sete imobilizaram juvenis em 24 h, não ocorrendo recuperação da mobilidade após serem transferidos para água, provocando, dessa forma, porcentagens de mortalidade semelhantes à induzida pelo nematicida aldicarbe utilizado como controle. Os mesmos isolados também inibiram eficientemente a eclosão dos juvenis. Dois isolados provocaram a morte de mais de 90% dos juvenis após 48 h de exposição. Diferentes diluições dos filtrados dos oito isolados mais eficientes também foram testadas. Maiores índices de mortalidade e redução na eclosão foram provocados pelo filtrado não diluído e pelas diluições em água 1:1 e 1:2 (v/v).

To obtaining the filtrates, bacteria were cultivated in liquid trypic soy broth medium for seven days at 28 ºC under constant stirring, centrifugated at 10,000 g for 15 min and the supernatant was filtrated by 0,22 µm Millipore. Nonmotile Meloidogyne javanica and dead ones were counted 24 and 48 h later and hatched J2 were counted 15 days after setting up the experiment. Seven of 40 bacterial isolates tested immobilized the juveniles within 24 h, and they could not recover even in water. This effect was similar to the aldicarb treatment used as control. The filtrates of isolates also inhibited egg hatching. Two isolates killed more than 90% of J2 after 48 h of exposure. Filtrate dilutions of the most efficient isolate in 1:1 and 1:2 (bacterial filtrate: water) also showed to have effective action on nematode behaviors.

Calus foram obtidos de tomateiro (Lycopersicon esculentum), cafeeiro (Coffea arabica), alfafa (Medicago sativa), orquídea (Dendrobium nobile), mostarda (Brassica rapa), batata doce (Ipomoea batatas), fumo (Nicotiana tabacum), cenoura (Daucus carota) e Crotalaria juncea em meio sólido de Murashige & Skoog (MS) seguido do cultivo em meio líquido MS em temperatura de 25-28 ºC. Após um mês, a suspensão foi passada em membrana Millipore 0,22 µm, obtendo-se, assim, o exsudato da cultura de células de cada planta testada. Ovos ou juvenis de segundo estádio (J2) de Meloidogyne incognita foram incubados nesses exsudatos e avaliadas as percentagens de eclosão, mobilidade e mortalidade dos J2. Com exceção dos ovos incubados em exsudato de orquídea, todos os demais inibiram a eclosão quando comparados com a incubação em água (testemunha). Entretanto, nos exsudatos de L. esculentum, cafeeiro e C. juncea a inibição foi mais drástica, semelhante ao aldicarb, mas significativamente diferente e menor do que em soluções contendo ingredientes do meio MS (1-5). Todos os exsudatos reduziram a mobilidade e aumentaram a mortalidade, com maior intensidade em 24 h de exposição. Porém, maior redução na mobilidade ocorreu nos exsudatos de tomateiro e alfafa, enquanto maior mortalidade no exsudato de tomateiro, seguido pelo de mostarda.

Callus of Lycopersicon esculentum, Coffea arabica, Medicago sativa, Dendrobium nobile, Brassica rapa, Ipomoea batatas, Nicotiana tabacum, Daucus carota and Crotalaria juncea were obtained in Murashige & Skoog (MS) solid medium followed by cell cultivation in MS liquid medium at temperature varying from 25-28 ºC. After one month, the cell suspension was passed through a 0,22 µm Millipore membrane, and the resulting liquid was the cell exudate from each of the tested plants. Eggs or second-stage juveniles (J2) of Meloidogyne incognita were then incubated in these exudates and hatching, mobility and mortality percentages of the J2 were evaluated. Except for the eggs incubated in the exudate of orchid, all the exudates inhibited J2 hatching when compared with incubation in water (control). However, in L. esculentum, C. arabica and C. juncea exudates the inhibition was greatest, similar to aldicar, but significantly less and different than that found in solution of culture medium ingredients MS (1-5). All exudates reduced mobility and increased mortality of M. incognita J2, although theses were enhanced when exposed for 24 h. The greatest reduction of mobility occurred with the exudates of tomato and M. sativa, while greatest mortality occurred with the exudate of L. esculentum, followed by B. rapa.